沒有液氮罐如何凍存細胞

　　沒有液氮罐如何凍存細胞?不用液氮罐，在冰箱如何凍存4度/-20度/-70度各放多久啊?

　　如果不用液氮罐，可以用-70。我們(men) 是這樣做的，將細胞轉移至凍存管中，在-20放置半小時到一小時左右，預凍。之後放入-70中，我們(men) 嚐試過載-70中放置1年的細胞沒有問題，複蘇之後狀態尚佳。至於(yu) 更長時間我們(men) 沒有嚐試過，但是老板說1年半沒問題，在國外他試過。

　　細胞凍遵循：慢凍速溶的原則。

　　還可以拿毛巾包著凍存管就可以直接放進-70，即可以遵循細胞凍慢凍速溶的原則，又比較方便，不用先放-20，因為(wei) 是慢慢凍進去的，所以能更好的達到梯度凍存。

　　實際上，我認為(wei) 慢凍速溶原則是正確的。

　　慢凍是要給DMSO以滲透入細胞的時間，所以我的經驗是4度的半小時要保證，之後就基本上可以馬上凍起來也沒有什麽(me) 關(guan) 係了。

　　毛巾包裹法十分新穎，嗬嗬。不過，從(cong) 原理上看，確實是值得嚐試的好方法，既保證了時間，又省去了搬來搬去的麻煩。

　　至於(yu) -80度的保存時間，我親(qin) 眼所見，半年絕對沒有問題。

　　在4度的情況下，要看你是什麽(me) 細胞了，如果是老鼠的細胞可以放1小時左右，其他細胞最多半小時(本人做過試驗的);在-20度的情況下，老鼠的可以放1天左右，其他細胞半天，但其狀態不是很好了;在-70度的情況下，老鼠的細胞可以放1到2年，在此期間要複蘇一次看其生長情況，其他細胞最多一年了!

　　1. 選用對數生長期細胞，在收集細胞24小時前換液一次。

　　2. 用常規方法將細胞消化下來，按(1～5)×106/ml濃度、懸浮於(yu) 含有10% DMSO的小牛血清或生長液中。凍存的細胞數量要充分，因複蘇時接種的細胞數量應比平常多一些。

　　3. 用吸管吸取細胞懸液，分裝於(yu) 無菌安培管中(沒管1ml)，嚴(yan) 密封口，放入三層紗布小袋，注明細胞名稱和凍存時間，便於(yu) 以後查找。

　　4. 凍存 當前已有專(zhuan) 用細胞凍存器，能精確地控製凍存溫度。在無凍存器的情況下，可用手工方法。從(cong) 把安培懸液在液氮容器口開始，在30～40min內(nei) ，下降到液氮表麵，在停30min後，直接投入液氮中。或先將安培移入液氮罐口頸部氣相中過夜，次日將紗布袋緩慢下降至液氮中，曆時3分鍾。在液氮中可長期保存。 若沒有液氮，可存於(yu) -80冰箱內(nei) ，不過注意保存時間，比液氮短，可保存3個(ge) 月左右。